Калкулатор за хроматографска резолуција

Внесете ги ретенционите времиња и ширините на два пика — или мртвото време на колоната, ретенционите времиња и бројот на подови — и добијте ја резолуцијата Rs, исходот од раздвојувањето и соодветната формула со заменети вредности.

Мерења

Почетни податоци

Ретенционо време на првиот пик tR1

Ретенционо време на вториот пик tR2

Ширина на првиот пик w₁

Ширина на вториот пик w₂

Ширината е измерена на

Единица мерка на внесените вредностиRs е сооднос, па не е потребна конверзија — секоја вредност само треба да има иста единица мерка, минути, секунди или дури милиметри на TLC плоча.

Прикажани децимали

Резолуција

Резолуција Rs

—

Формула и замена

Двете формули за ширина претпоставуваат два симетрични пикови во форма на ѕвоно со слична големина. Појавата на опашка (tailing) или фронт (fronting) прави истата Rs да изгледа подобро од реалното раздвојување, а при многу ниска резолуција самите ширини се тешки за мерење — потврдете ги граничните случаи во вашиот софтвер за интеграција. Rs = 1.5 е „базна линија“ за два пика со еднаква големина; на пикови со многу различни големини им треба повеќе.

Пополнете ги четирите мерења за да ја добиете резолуцијата.

Секој број што ќе го внесете останува во овој прелистувач — ништо не се пренесува.

ЧПП

Ширина на базната линија или ширина на половина висина — која треба да ја користам?

Користете ја онаа што е наведена во вашата монографија, стандардна оперативна процедура (SOP) или систем за податоци, и држете се до неа за споредби. Ширината на тангентата (базната линија) е класичната форма на фармакопејата; ширината на половина висина е полесна за мерење кај шумни или делумно споени пикови и е она што го прикажува повеќето софтвер за хроматографија. За симетричен пик, двете се согласуваат во рамките на мал дел од процентот, бидејќи Гаусовиот пик е широк 4σ на базната линија и 2.355σ на половина висина.

Која резолуција се смета за „базно раздвојување“?

Rs = 1.5 за два еднакви по големина, симетрични пикови: нивните центри се на растојание од шест стандардни девијации и преклопувањето е околу 0.1%. При Rs = 1.0 приближно 2% сè уште се преклопува, што често е прифатливо за идентификација, но не и за точна квантификација. Многу монографии во фармакопеите бараат 1.5 или 2.0 за методот да остане робустен, а на мал пик што се наоѓа на работ на голем сосед му треба повеќе од 1.5.

Мојата резолуција е премногу ниска — што ја подобрува?

Резолуционата равенка има три лостови. Ефикасноста N (подолга колона или помали честички) помага само со својот квадратен корен, па удвојувањето на N ја зголемува Rs за околу 41%. Селективноста α (различна хемија на колоната или состав на мобилната фаза) е најсилниот лост. Ретенцијата k′ е најважна во нискиот опсег — раздвојувањата работат најдобро со k′ помеѓу околу 2 и 10. Режимот со параметри на колоната покажува точно колку подови би биле потребни за вашите α и k′ за да се постигне Rs = 1.5.

Може ли да го користам ова за TLC плоча?

Да. Истата формула за половина висина се применува и за миграционите растојанија на плоча: внесете ги растојанијата што ги поминале двете дамки како ретенциони вредности, а нивните дијаметри како ширини, сите во милиметри. Rs е сооднос, па единицата се крати — важна е само доследноста.

Напишано и проверено од уредничкиот тим на BroBroGo.Последно ажурирано: 2026-08-01

Математички основи на хроматографската резолуција

Резолуцијата (Rₛ) претставува квантитативно мерило за квалитетот на раздвојувањето на два соседни хроматографски пика во еден хроматограм. Нејзината вредност директно зависи од растојанието помеѓу максимумите на двата пика и нивните ширини. Математички, овие равенки се изведени од теоријата за Гаусови пикови, каде што се претпоставува дека пиковите имаат симетрична форма на ѕвоно.

Во Гаусовата дистрибуција, ширината на пикот е поврзана со неговата стандардна девијација (σ). Ширината измерена на базната линија со помош на тангенти соодветствува на растојание од 4σ, додека ширината измерена на половина од максималната висина соодветствува на 2.355σ. Калкулаторот овозможува пресметка на резолуцијата преку двата пристапи, во зависност од избраниот режим на работа.

Фармакопејски стандарди и избор на формула

Различни меѓународни монографии и стандардни оперативни процедури наложуваат примена на специфични математички модели за евалуација на системската погодност. Алатката нуди избор помеѓу следниве формули во зависност од почетните податоци:

Ширина на базната линија (USP 2×): Овој метод ги користи тангентите на базната линија и се пресметува според формулата: Rₛ = 2(t_R2 - t_R1) ÷ (w₁ + w₂) Оваа формула е дефинирана во поглавјето USP <621>.
Ширина на половина висина (USP 1.18× / Ph.Eur. 2.2.46): Овој пристап е широко прифатен во европската и американската фармакопеја бидејќи полесно се мери кај пикови со шум или кај делумно преклопени сигнали. Формулата гласи: Rₛ = 1.18(t_R2 - t_R1) ÷ (w_(1 / 2,1) + w_(1 / 2,2))
Параметри на колона (Пурнелова равенка): Кога се анализираат перформансите на самата колона, се користи равенката на Пурнел (Purnell) која ги поврзува ефикасноста, селективноста и ретенцијата: Rₛ = (√(N) ÷ 4) · ((α - 1) ÷ α) · (k′₂ ÷ (1 + k′₂))

Трите лостови на Пурнеловата равенка

За оптимизација на хроматографскиот метод, Пурнеловата равенка јасно ги дефинира трите независни фактори кои влијаат врз резолуцијата:

Ефикасност (N): Бројот на теоретски подови ја претставува способноста на колоната да ги задржи пиковите тесни. Бидејќи резолуцијата зависи од квадратниот корен на N (√(N)), зголемувањето на ефикасноста (на пример, преку подолга колона или помали честички) бара значителен напор за релативно скромно подобрување на резолуцијата.
Селективност (α): Ова е соодносот на ретенционите фактори на двата пика (α = k′₂ ÷ k′₁). Селективноста е најмоќниот лост за подобрување на раздвојувањето. Дури и минимални промени во хемијата на стационарната фаза или составот на мобилната фаза можат драстично да ја зголемат резолуцијата.
Ретенција (k′): Ретенциониот фактор го мери времето кое аналитот го поминува во стационарната фаза во однос на мртвото време (t_M). Влијанието на ретенцијата е најизразено при ниски вредности (k′ < 2). Најдобар баланс помеѓу резолуцијата и времето на анализа се постигнува кога k′ е во опсег помеѓу 2 и 10.

Практично мерење и физика на раздвојувањето

При практична работа во лабораторија, изборот на метод за мерење на ширината на пикот зависи од квалитетот на хроматограмот. Иако ширината на базната линија е класичен параметар, појавата на шум на базната линија или мало преклопување го отежнува прецизното повлекување на тангентите. Во такви случаи, ширината на половина висина нуди поголема репродуктивност.

Физичкото преклопување на пиковите директно корелира со вредноста на Rₛ:

При Rₛ = 1.0, преклопувањето на две еднакви Гаусови распределби изнесува приближно 2%, што се смета за делумно раздвојување.
При Rₛ = 1.5, се постигнува таканаречено „базно раздвојување“ (baseline separation). Ова одговара на растојание од 6σ помеѓу центрите на пиковите, каде преклопувањето е само околу 0.1%.
Доколку пиковите се со многу различна големина (на пример, нечистотија во траги веднаш до главен пик) или доколку покажуваат асиметрија (опашка или фронт), вредноста од Rₛ = 1.5 не е доволна за точна квантификација и потребна е повисока резолуција.

Примена кај рамнинска хроматографија (TLC)

Иако резолуционите равенки примарно се развиени за колони (HPLC и GC), истите принципи можат да се применат и кај тенкослојната хроматографија (TLC). Кај TLC, наместо ретенциони времиња во минути или секунди, се користат миграционите растојанија на дамките од стартната линија измерени во милиметри. Ширините на пиковите се заменуваат со дијаметрите на самите дамки во правецот на елуирање, исто така изразени во милиметри. Бидејќи резолуцијата е бездимензионален сооднос, сите единици мерки се кратат, овозможувајќи директна примена на калкулаторот за евалуација на TLC плочи.

Локална обработка и заштита на податоците

Сите пресметки на овој калкулатор се извршуваат локално во веб-прелистувачот на корисникот. Внесените бројки, ретенциони времиња и параметри на колоната не се испраќаат ниту се зачувуваат на надворешни сервери.

Често поставувани прашања (FAQ)

Која резолуција се смета за „базно раздвојување“? Rs = 1.5 за два еднакви по големина, симетрични пикови: нивните центри се на растојание од шест стандардни девијации и преклопувањето е околу 0.1%. При Rs = 1.0 приближно 2% сè уште се преклопува, што често е прифатливо за идентификација, но не и за точна квантификација. Многу монографии во фармакопеите бараат 1.5 или 2.0 за методот да остане робустен, а на мал пик што се наоѓа на работ на голем сосед му треба повеќе од 1.5.

Ширина на базната линија или ширина на половина висина — која треба да ја користам? Користете ја онаа што е наведена во вашата монографија, стандардна оперативна процедура (SOP) или систем за податоци, и држете се до неа за споредби. Ширината на тангентата (базната линија) е класичната форма на фармакопејата; ширината на половина висина е полесна за мерење кај шумни или делумно споени пикови и е она што го прикажува повеќето софтвер за хроматографија. За симетричен пик, двете се согласуваат во рамките на мал дел од процентот, бидејќи Гаусовиот пик е широк 4σ на базната линија и 2.355σ на половина висина.

Мојата резолуција е премногу ниска — што ја подобрува? Резолуционата равенка има три лостови. Ефикасноста N (подолга колона или помали честички) помага само со својот квадратен корен, па удвојувањето на N ја зголемува Rs за околу 41%. Селективноста α (различна хемија на колоната или состав на мобилната фаза) е најсилниот лост. Ретенцијата k′ е најважна во нискиот опсег — раздвојувањата работат најдобро со k′ помеѓу околу 2 и 10. Режимот со параметри на колоната покажува точно колку подови би биле лично потребни за вашите α и k′ за да се постигне Rs = 1.5.

Може ли да го користам ова за TLC плоча? Да. Истата формула за половина висина се применува и за миграционите растојанија на плоча: внесете ги растојанијата што ги поминале двете дамки како ретенциони вредности, а нивните дијаметри како ширини, сите во милиметри. Rs е сооднос, па единицата се крати — важна е само доследноста.